本报首页 版面概览
往期回顾
   
当前:30版(2020年08月19日) 上一版 下一版
新冠病毒实验室检测方法研究进展及应用价值
成都市郫都区疾病预防控制中心 何凤媛

    新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的病原体为新型冠状病毒(SARS-CoV-2),属于β属冠状病毒,其核酸为单股正链RNA。大量研究表明,该病毒主要通过飞沫、接触途径传播。也有研究提示存在其他传播途径的可能,如粪—口、气溶胶和母婴传播途径。


    传播途径的多样化和不易被阻断的特点,使新冠病毒易于传播和快速广泛传播。为控制新冠病毒传播流行给人群和环境造成严重危害,及时切断传播链是公认的最有效办法。


    目前,新冠病毒病原体实验室检测方法主要是病毒分离、核酸检测、抗体检测3个类别,病毒分离是病原学检测的金标准,但SARS-CoV-2对实验室生物安全要求高,能达到等级要求并开展检测工作的实验室数量极少,阻碍了该方法的广泛应用。为满足疫情期间大量检测需求,国内外众多研究者陆续研发出各种检测方法,主要分核酸和抗体检测两类。以下对新冠核酸和抗体检测作一简介。

 


核酸检测的现状

 


核酸检测在新冠肺炎检测中应用较多的有测序技术、PCR技术、等温扩增技术(LAMP)。基因测序技术已发展到第四代,大大缩短了检测时间,但其原理决定了耗时长、费用高的特点,不利于广泛推广。PCR技术中荧光定量PCR法利用靶标基因进行定性的原理,决定了它的高灵敏度和特异性,是目前应用最广泛的核酸检测方法。等温扩增技术有灵敏度高、操作方便、检测效率高等优点,但其低温扩增原理易造成假阳性结果。

 


核酸检测的应用

 


在新冠肺炎第6版防控方案中,同一份标本中新冠病毒2个靶标:开放读码框(ORF1ab)和核壳蛋白(N)均为阳性或两种标本实时荧光RT-PCR同时出现单靶标阳性,可判定为阳性病例。


这种针对新冠病毒核酸序列上保守区域进行定性检测的方法灵敏度高,但临床中发现,确诊病例的核酸检测结果可为“假阴性”。造成这种结果的原因多种多样,如检测试剂是否有效、样本采集部位是否足量、样本采集后的运输保存条件是否引起病毒变化、实验操作步骤是否规范、病毒是否发生变异等。

 


抗体检测的方法与应用

 


    抗体检测分为酶联免疫吸附法、化学发光法、胶体金免疫层析法等,原理是通过检测血液标本中IgM和IgG抗体间接判断病毒感染。IgM是机体初次免疫应答产生的抗体,用来判断早期感染;IgG是机体再次免疫应答产生的抗体,作为感染和既往感染的指标。同时,检测IgM、IgG抗体可提高检测的准确性,减少漏诊。多个临床研究表明,有高血压等基础疾病长期服药的人群样本、溶血样本、细菌污染等多个因素易造成大量“假阳性”结果。

 


核酸与抗体检测结果的联合应用

 


    实验室检测中,核酸和抗体检测各有优缺点。为提高阳性病人检出率,重点关注核酸检测结果阴性时,联合抗体结果的解读。RT-PCR结果为阴性时IgM单阳,判断为感染者,1周后可复核IgG和核酸检测;RT-PCR结果为阴性时IgG单阳,判断为既往感染者;RT-PCR结果为阴性时,抗体双阴,同时满足流行病学和临床症状排除者标准可排除感染;RT-PCR结果为阴性时,抗体双阳判断为感染者恢复期,需复核核酸检测。


    两种检测方法的联用可在一定程度消弱核酸检测中假阴性和抗体检测中假阳性给结果判定带来的误导。


   “新冠病毒感染的肺炎诊疗方案(第7版)”中,新增“将血清SARS-CoV-2特异性IgM和IgG抗体阳性作为病原学诊断标准之一”,核酸和抗体检测的联用对病例筛查意义重大,期待国内外学者尽早研发出高效、易操作、高灵敏、高特异的新一代检测方法,以进一步提高新冠病毒肺炎患者的筛查能力。